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抗酸土脂环酸芽孢杆菌单克隆抗体实验

日期:2018-03-26 人气:1323

摘要:脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)俗称耐热菌、嗜酸耐热菌、耐热耐酸菌等,能引起巴氏灭菌果汁风味改变甚至腐败,而目前的杀菌条件难以消除该菌。

美国、欧洲大部分果汁消费国脂环酸芽孢杆菌达到了小于 1 个/10 mL 的要求,而我国部分浓缩果汁中脂环酸芽孢杆菌的含量超过了1个/10 mL,并且我国果汁产品中脂环酸芽孢杆菌的污染没有制定相应的限量值以及检测方法的滞后,已成为制约我国浓缩苹果汁出口的主要障碍。

因此,如何在浓缩果汁中快速准确地检测和鉴定脂环酸芽孢杆菌已成为苹果浓缩汁生产企业亟待解决的问题。目前脂环酸芽孢杆菌的检测方法主要有传统检测方法、数值分类技术、细胞膜脂肪酸组成检测、代谢产物的检测、基于聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)的分子生物学检测、傅里叶红外光谱检测等,但这些方法对所需仪器设备以及设备操作人员技术要求较高,检测方法复杂,不利于浓缩苹果汁生产厂家在加工生产环节对该菌进行有效、简便的检测和控制,且不同检测方法判定标准的差异会导致结果存在一定的差异,而基于 PCR 的分子生物学方法快速、简便,因此成为目前检测该菌的首选实验室方法。

为了建立脂环酸芽孢杆菌快速检测方法,利用免疫胶体金的快速高效、灵敏准确、结果受外因影响较少、安全简便、不需任何仪器和设备、成本低廉、所需试剂和样本量少、实验结果可长期保存等特点;从而有效地在生产环节中大大降低原料、主要生产工段、生产用水、超滤出的苹果清汁等环节的脂环酸芽孢杆菌的污染,以及时指导生产。本试验利用细胞融合技术,制备了单克隆抗体并对其特异性进行鉴定,旨在建立抗脂环酸芽孢杆菌的杂交瘤细胞株;并对单克隆抗体的特性进行研究,为检测用胶体金试纸条的制备打下良好的基础,从而期望实现对脂环酸芽孢杆菌的快速检测,而利用其制备单克隆抗体以及制备胶体金免疫层析试纸检测浓缩果汁中 A. acidoterrestris 在国内外尚属首次。

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